兔血清總補體elisa試劑盒操作方法

　　兔血清總補體ELISA試劑盒是一種常見的實驗試劑盒，可以用于檢測血清中的總補體含量。在醫(yī)學、生物學和醫(yī)藥工業(yè)領域中廣泛應用。
 
　　一、試劑盒組成
 
　　1. 酶標板:一枚96孔ELISA酶標板。
 
　　2. 標準樣品:兔血清補體標準溶液。
 
　　3. 洗滌緩沖液: 20倍濃度的洗滌緩沖液，用于洗滌酶標板。
 
　　4. 加樣緩沖液: 10倍濃度的加樣緩沖液，用于稀釋血清等樣品。
 
　　5. 檢測抗體: 抗兔IgG辣根過氧化物酶標記二抗。
 
　　6. 底物液: tetramethyl benzidine (TMB)顯色底物。
 
　　7. 停止緩沖液: 2mol/L硫酸，停止底物的顯色反應。
 
　　二、試驗原理
 
　　兔血清總補體ELISA試劑盒是一種競爭性ELISA法。樣品中的總補體和免疫吸附板上的固定抗原競爭結合檢測抗體的酶標記二抗。未結合的檢測抗體被洗去，添加底物后，檢測抗體上的酶標記將被底物催化，使底物發(fā)生顯色反應，得到顏色的強度與血清中總補體濃度成反比。
 
　　三、操作方法
 
　　1. 準備涂層抗原溶液：將涂層抗原(血清補體標準溶液)稀釋至適當濃度(建議500ng/ml)，加入96孔的酶標板中，放置在4℃下過夜。
 
　　2. 樣品和標準品制備：樣品和標準品需用10倍的加樣緩沖液稀釋至合適濃度。
 
　　3. 加樣：將10ul的稀釋樣本分別加入微孔板孔中，每個孔分別加入200ul的稀釋后的檢測抗體。
 
　　4. 孵育：在37℃孵化1小時。
 
　　5. 洗滌：用洗滌緩沖液洗滌板孔4次，每次吸去液體后吸起余液，以避免固體物沉積于底部。
 
　　6. 染色：加入50ul的底物液，在室溫下靜置15min。
 
　　7. 停止反應：加入50ul的停止緩沖液終止反應，樣品變成黃色。
 
　　8.檢測測量：在450nm波長下，測量每個孔的OD值。
 
　　兔血清總補體elisa試劑盒在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
 
　　1、酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
 
　　2、酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
 
　　四、結果分析
 
　　根據(jù)標準品法建立標準曲線，通常將標準品的OD值作為Y軸，標準品中總補體的濃度作為X軸，利用標準曲線把樣本的OD值轉換成總補體濃度，得出樣本中的總補體濃度。
 
　　五、存儲方法
 
　　1.試劑盒應貯存在4℃下，干燥避光處，有效期為12個月。
 
　　2.未開封的試劑盒中，如不含標明冷凍于何處的冷凍品，則均須冷凍保存，凍存期不超過1年。
 
　　3.已開封的試劑盒中，可能存在供一次實驗的各個試劑用量不匹配、特殊情況下洗板的洗滌次數(shù)、緩沖液和標準品等物品的采樣后的使用均可能影響其穩(wěn)定性。因此，我們強烈建議我們客戶即使查詢珀金質量保證書，也應在實驗前檢查各個試劑是否結晶、物品是否在有效保質期內等是否正常，以保證試驗數(shù)據(jù)的可靠性。
 
　　總之，兔血清總補體ELISA試劑盒是一種簡單、敏感、特異的實驗試劑，可用于檢測血清中總補體含量，是生物醫(yī)學、生物學和醫(yī)藥工業(yè)研究中重要的實驗工具。